黔南州食品药品检验检测院，贵州 都匀 558000

淫羊藿为小檗科植物箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、巫山淫羊藿EpimediumwushanenseT. S. Ying、粗毛淫羊藿EpimediumacuminatumFranch.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.、天平山淫羊藿EpimediummyrianthumStearn、毡毛淫羊藿EpimediumcoactumH. R. Liang et W. M. Yah、光叶淫羊藿EpimediumSagittatumvar.glabratumT.S.Ying的干燥根(夏、秋二季采收，洗净，晒干)[1]。现代药理研究表明，淫羊藿对免疫系统、心脑血管系统、生殖系统、内分泌系统、血液系统、骨骼系统、肿瘤、哮喘、真菌抑制等方面均有一定的作用[2-3]。作为我国传统的补益中药，淫羊藿根在民间药用十分普遍，淫羊藿根重在补虚，祛风湿，主要用于治疗关节炎，风湿痹痛。淫羊藿根中所含活性成分为黄酮类化合物如：淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C等。为有效控制该药材质量，以淫羊藿苷、朝藿定C为对照，采用薄层色谱法鉴别淫羊藿根，操作简便、成本较低、分离速度快，结果直观，易于辨别。

1.1 仪器 TLC PLATE HEATER Ⅲ薄层板加热器，SK250LHC超声波清洗器(上海科导仪器有限公司)，梅特勒AG135电子天平，。

1.2 材料 淫羊藿苷(批号：110737-200415)、藿定C(批号：111780-201503)，对照品均购于中国食品药品检定研究院。水为哇哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。淫羊藿根样品分别采集自贵州各地区，共11批(见表1)。所有样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。样品洗净后晒干，粉碎，过三号筛，置干燥器中保存。

2.1 提取方法的考察 称取S1样品细粉0.2 g 4份，分别按下述方法处理后作为供试品溶液：①加乙醇2 mL研磨，滤过，取续滤液作为供试品溶液。②加无水乙醇10 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。③加无水乙醇10 mL，加热回流30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。④加无水乙醇10 mL，超声30 min后加热回流30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品及朝藿定C对照品适量，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

取上述供试品溶液及对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板上，以氯仿：甲醇：水(13.5∶6∶2)静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置薄层板加热器上105℃加热至斑点清晰。结果：方法①主斑点不清晰；方法②主斑点清晰且背景较浅，易于辨别；方法③、④主斑点与背景混为一体，未能辨别。方法②操作简便，节时省力，薄层色谱图谱展距适中,斑点清晰，干扰少，故选择方法②为供试品溶液的制备方法。

2.2 展开系统的考察 取S1样品按提取方法②制成供试品溶液，取供试品溶液和对照品溶液各5 μL，点于薄层板上，分别在下述展开系统中展开：①硅胶H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)。②硅胶G板，甲醇-丁酮-氯仿-水(4∶6∶6∶1)。③硅胶G板，氯仿-甲醇-水(13.5∶6∶2)摇匀静置至澄清的下层溶液。

展开后，取出晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置薄层板加热器上105℃加热至斑点清晰。结果：系统①与淫羊藿苷对照品对应的斑点清晰，分离效果佳，但与朝藿定C对照品对应的斑点严重拖尾，未能达到理想的分离效果；系统②分离效果差，斑点不清晰，严重拖尾；系统③两个主斑点清晰，分离效果好，背景干扰小。因此选择③为淫羊藿根薄层色谱鉴别的展开系统。

2.3 显色方法的考察 取S1样品按提取方法②制成供试品溶液，取供试品溶液和对照品溶液各5μL，点于薄层板上，在展开系统③中展开，取出晾干，分别在下述方法中显色：①喷以三氯化铝试液，晾干，置紫外光灯(36 5nm)下检视。②喷以5%三氯化铁乙醇溶液，晾干，日光下检视。③喷以10%硫酸乙醇溶液，置薄层板加热器上105℃加热，日光下检视。结果：方法①主斑点荧光不明显，且有背景荧光干扰，使主斑点边界不清晰，难辨别，方法②主斑点颜色模糊，与背景色彩对比不明显，方法③主斑点颜色清晰，边界清楚，与背景对比明显，故选方法③为淫羊藿根薄层色谱鉴别的显色方法。

2.4 点样量的考察 取S1样品按提取方法②制成供试品溶液，取供试品溶液1、2、3、4、5、6、10 μL，淫羊藿苷对照品溶液和朝藿定C对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板上，以氯仿：甲醇：水(13.5∶6∶2)静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置薄层板加热器上105℃加热至斑点清晰，结果供试品溶液以点样量5 μL效果最佳，点样量小斑点不明显，点样量大则拖尾严重，干扰大，分离效果差。故选5 μL为淫羊藿根薄层色谱鉴别的点样体积。

2.5 耐用性考察 按照国家药典委员会“中药分析方法验证指导原则实施细则”的相关要求，进行以下耐用性考察。①温度的考察：进行了低温(4℃)、室温(20℃)、高温(40℃)的考察，分离效果均较好，斑点清晰，没有明显差异。②湿度的考察：进行了低湿度(25%)、中等湿度(50%)和高湿度(75%)的考察，结果表明在上述条件下都能较好分离，未有明显差异。

2.6 淫羊藿根的薄层色谱鉴别 取样品细粉0.2 g，加无水乙醇10 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品及朝藿定C对照品适量，加甲醇制成1 mg/mL的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验(通则0502)，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13.5∶6∶2)摇匀静置至澄清的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图1所示。

淫羊藿属植物种类繁多，仅中国就有约47种(不含种下类群)，《中国药典》只收载了5种，上文中提到的黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum)和水城淫羊藿未被收载于药典，但二者均是贵州省当地民众常用种类。其中，黔岭淫羊藿(EpimediumshuichengenseS.Z.He)为《贵州省中药材、民族药材质量标准》收载品种，在贵州、四川、湖北、湖南均有分布，种群数量多，产量及蕴藏量大。水城淫羊藿是20世纪90年代中期何顺志教授发现的新种，目前仅在贵州水城发现有分布，产地长期作淫羊藿入药，建议收载于新版《贵州省中药材、民族药材质量标准》[5]。

淫羊藿根作为我国民间常用中药之一，应对其生产和流通进行严格的质量控制。2003 年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收载的淫羊藿根仅有性状描述，缺乏必要的质量控制项目。2015年版《中国药典》一部淫羊藿项下以淫羊藿苷为对照品对其建立薄层色谱鉴别方法，然而，在本实验开展前，笔者对药典提取方法及展开系统进行多次验证，得到的薄层鉴别图显色效果不佳，斑点不清晰，难以辨别，且存在一定拖尾、扩散、边缘效应等现象。本实验从提取方法、展开系统、显色方法等方面对淫羊藿根进行了系统的研究，最终优选出上述薄层鉴别方法，该方法简便、可行、斑点清晰，易于检出，且分离效果较药典方法好，专属性强，为更好地控制淫羊藿根质量提供了科学依据。

中国民族民间医药2018年23期